众所周知，活细胞密度(VCD)和活率(viability)是评估哺乳动物细胞系生长状态的重要指标。生物制药研发人员进行悬浮细胞培养，每天所不能避免的工作，就是取样计数。使用细胞计数板进行人工计数无疑是金标准方法。
但这个传统方法其劳动强度十分惊人，样品量少的时候还能吃得消，样品量大一些，甚至于要做大规模的DOE实验时，估计很多实验人员想死的心都会有。而且人工计数有较强的主观性，对操作人员的经验及操作熟练度有一定要求，导致有时候数据的重现性和可比性会受到质疑。
幸好，细胞计数仪，尤其是高通量的自动细胞计数仪的出现，让我们看到曙光。最早出现的是基于台盼蓝染色法结合智能图像识别技术的计数仪，后来又相继出现简化至流式细胞仪和应用库尔特原理的设备。这些设备不同程度地为实验人员减少了繁琐的实验步骤，大大提升了实验效率。
但与此同时，在设备的使用过程中，很多实验人员却会发现，不同设备间的数据有时会存在差异，而且与人工计数的结果也可能存在偏差 。
那我们该如何评价与验证计数结果的准确性呢？来自瑞士的三位科学家在Journal of Biotechnology上发布的一项独立研究结果就给了我们一些思路。研究中，他们使用自己开发的一套双荧光染色方法，将在贝克曼公司的CytoFLEX®流式细胞仪上的CHO-K1细胞计数结果，与手工计数及经验证的默克密理博Guava®easyCyte HT计数结果相比较，从而评价前者的特异性、准确度、精密度和重复性。这些实验包括：
1、软件系统的比较：对是否有预设参数、是否为开发平台进行了考量；
2、VCD测试重复性比较：通过对同一样品的多次重复测试，比较VCD的标准平均偏差及测试的报错率；
3、分析速度比较：通过连续自动进样24个，比较不同系统的分析时长；
4、活率测试准确性比较：通过对同一样品的多次重复测试，比较不同方法活率结果的差异；
5、线性范围比较：通过梯度稀释，测试出两个系统的检出限及线性范围；
此外，他们验证了在一次Fed-Batch中Day3~Day10的样品是否能在同一稀释比例下准确计数。
由此，他们得出结论是CytoFLEX®系统可以作为一个快速可靠的高通量细胞计数方法而被采纳。
三位科学家在文末不忘强调，该研究未受资助:-) 。但无论如何，他们所采用的验证方法是值得我们参考的。而细胞计数仪也有许多，功能参数各不相同，也各有优劣。我们归类整理一下，大致如下：
当然了，鱼与熊掌不可兼得，我们有必要用严谨的方法进行评估和选择最合适自己的系统。毕竟，只有合适的才是最好的。
QuaCell®技术团队凭借丰富的项目经验，开展从细胞株构建、培养基开发、至工艺优化的一站式CRO服务，助推生物制药上游研发进程，提供全程GMP文件体系及IND申报支持。
END
排版丨贺沃希
www.hwashin.com.cn
更多精彩等着你
