我们的细胞该如何计数?

幸好，细胞计数仪，尤其是高通量的自动细胞计数仪的出现，让我们看到曙光。最早出现的是基于台盼蓝染色法结合智能图像识别技术的计数仪，后来又相继出现简化至流式细胞仪和应用库尔特原理的设备。这些设备不同程度地为实验人员减少了繁琐的实验步骤，大大提升了实验效率。

但与此同时，在设备的使用过程中，很多实验人员却会发现，不同设备间的数据有时会存在差异，而且与人工计数的结果也可能存在偏差 。

那我们该如何评价与验证计数结果的准确性呢？来自瑞士的三位科学家在Journal of Biotechnology上发布的一项独立研究结果就给了我们一些思路。研究中，他们使用自己开发的一套双荧光染色方法，将在贝克曼公司的CytoFLEX®流式细胞仪上的CHO-K1细胞计数结果，与手工计数及经验证的默克密理博Guava®easyCyte HT计数结果相比较，从而评价前者的特异性、准确度、精密度和重复性。这些实验包括：

1、软件系统的比较：对是否有预设参数、是否为开发平台进行了考量；

2、VCD测试重复性比较：通过对同一样品的多次重复测试，比较VCD的标准平均偏差及测试的报错率；

3、分析速度比较：通过连续自动进样24个，比较不同系统的分析时长；

4、活率测试准确性比较：通过对同一样品的多次重复测试，比较不同方法活率结果的差异；

5、线性范围比较：通过梯度稀释，测试出两个系统的检出限及线性范围；

此外，他们验证了在一次Fed-Batch中Day3~Day10的样品是否能在同一稀释比例下准确计数。